O algodoeiro é conhecido pela sua composição tissular, rica em compostos fenólicos, como terpenóides e outros metabólicos secundários. Eles promovem degradação e oxidação dos ácidos nucléicos durante os procedimentos de extração de seus diferentes tecidos. Estudo da Embrapa Algodão apresentou um protocolo de extração fácil e rápido de ácido ribonucleico (RNA), cujos procedimentos não necessitam de ultrarrefrigeração.
O isolamento de RNA íntegro e de boa qualidade a partir de tecidos vegetais é fundamental para muitos trabalhos em nível molecular, no que se refere a análises de expressão gênica como RT-PCR e construção de bibliotecas de cDNA. A presença de compostos fenólicos e de polissacarídeos pode interferir no isolamento ou na qualidade do RNA. O protocolo estudado resultou em boa recuperação de RNA íntegro e de boa qualidade, variando em rendimento entre os tecidos usados.
A maioria dos métodos de extração de RNA é baseada em precipitação por guanidina ou kits comerciais. O que diferencia entre as escolhas dos métodos é a concentração e pureza do RNA obtido, associado a alguns entraves peculiares a cada um deles, por exemplo, a grande quantidade de tecido requerida e a necessidade de precipitar com cloreto de lítio – LiCl – por período igual ou superior a 12 horas.
Para obter uma boa resolução do RNA, evitando a contaminação por fenóis e a consequente oxidação, foi usado PVP (polivinilpirrolidona), que se liga a polissacarídeos, fenóis e demais compostos, e β-mercaptoetanol, que facilita a lise celular e atua como agente redutor. Ele diminui as pontes de dissulfetos e desnatura proteínas, incluindo as RNAses. Utilizou-se também uma solução de FCA (fenol:clorofórmio:álcool isoamílico, 25:24:1 – v/v/v), objetivando a desproteinização, remoção de contaminantes e melhor recuperação de RNA.
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Métodos e resultados da extração rápida e fácil de RNA em diferentes algodoeiros