Com a intenção de identificar as proteínas relacionadas aos mecanismos de resistência do algodão, foi efetuado um estudo proteômico comparativo das raízes de genótipos suscetíveis e resistentes ao nematóide das galhas. Os resultados indicaram que a abordagem proteômica se mostrou promissora na identificação de novas moléculas de interesse biotecnológicos, que podem servir como ferramentas no desenvolvimento de plantas resistentes a pragas, como a Meloidogyne ingocnita.
Apesar da baixa concentração de proteínas nas raízes, o trabalho permitiu o estabelecimento de um protocolo eficiente na preparação de amostras de raízes de algodoeiro para a realização de eletroforese bidimensional. Para criar um método simples e prático para a análise proteômica, foram testados três tampões: A – NaH2PO4 50mM pH7,0, NaCl 20mM, PMSF 2mM, DTT 10mM –; B – Piridina 50mM pH 5,0, SDS 1%, tiourea 20mM –; e C – Tris-HCL 40mM pH 7,5, sacarose 250mM, Triton X-100 1%, EDTA 10mM, PMSF e DTT 1 mM.
O tampão C foi o que apresentou melhor resultado, com maior número de bandas visualizadas. Em relação às plantas controle não infectadas, nove proteínas apresentaram um aumento de expressão após cinco dias da infecção, e cinco proteínas apresentaram redução nas raízes de linhagem resistente de algodoeiro. Após 15 dias de infecção, foram verificadas 15 proteínas com expressão aumentada.
Para a variedade suscetível, foram observadas no quinto dia da infecção nove proteínas com aumento e uma com redução de expressão. Aos 15 dias da infecção, foram observadas 15 proteínas com aumento e três com redução de expressão. Aumentos da expressão protéica em resposta à infecção por M. incognita podem estar envolvidos no mecanismo de resistência induzida. É possível que a indução dos genes PR ocorra de maneira precoce no genótipo resistente, impedindo o desenvolvimento do nematóide, após sua penetração no sistema radicular.
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Métodos de análise proteômica de raízes do algodoeiro infectadas por nematóides das galhas
Análise proteômica de raízes do algodoeiro infectadas por nematóides das galhas